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脑立体定位仪技术与大小鼠实验具体操作方法

时间:2023-12-18 08:39:27点击次数:

脑立体定位仪技术与大小鼠实验具体操作方法

实验原理   

        脑立体定位技术被广泛的运用于脑的损毁、刺激和脑电记录的精确定位中,成为研究脑结构和功能必不可少的工具。脑立体定位技术主要是使用脑立体定位仪作为定位仪器,利用某些颅骨外面的标志(如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢状缝等)或其它参考点所规定的三度坐标系统,来确定皮层下某些神经结构的位置,以便在非直视暴露下对其进行定向的刺激、破坏、注射药物、引导电位等研究,是神经解剖、神经生理、神经药理和神经外科等领域内的重要研究方法。常用的实验动物,如大鼠、小鼠、猫等高等哺乳动物以及鸟类,其均有完全的外耳道,可用(耳棒)来定位。在确定了颅外标记之后,就可按脑立体定位图谱所提供的数据进行定位操作。实验器材脑立体定位仪,MC-5微操作仪,常规手术器械,钻孔针,纱布,干棉球,酒精,0.4%戊巴比妥钠(麻醉剂,现配现用),生理盐水,1ml注射器,3%双氧水, 小白鼠。


实验步骤

小鼠脑定位的系统大致分两种:

(1) 用耳间线中心定位,首先将两个耳棒尖端在定位仪滑道中间部位彼此相接触(两个耳棒读数相同),旋紧镙丝。然后取下一侧耳棒,另一耳棒不动。调节移动推进器,使校验电极尖端与耳棒尖端的中心点相触,即为A点(即耳间线中心点),并记下刻度值。然后,将推进器水平移动到门齿钩的上方,将门齿钩平面与校验电极尖端相触。这时就定出外耳道中心点与门齿牙板上面上沿之间的水平切面0点,记为H0。这时,动物的前囟和后囟基本处在一个水平面上,相差0-0.1mm。另外,规定耳间线中心点以上为+,向下为-;向嘴侧为+,向尾侧为-。

(2)用颅骨标志定位(常用前囟),即以前囟为嘴尾侧0点,由前囟向嘴侧为+,向尾侧为-,其它与上面定位方法相同。


 实验内容 

(1)动物麻醉:小鼠,体重20-30g,称重后以0.4%戊巴比妥钠腹腔麻醉注射时必须缓慢,随时注意动物状态。

(2)小鼠头部固定:将小鼠的门齿固定于脑定位仪上颌固定器,然后把一侧的耳捧推入动物的外道后,使动物的头在处于两滑道正中。再将另一耳捧推入另一侧的外耳道。这时观察两个耳棒的刻度一致后,将两耳棒上的固定螺丝扭紧,在将牙齿固定器上压鼻环 2 压下后扭紧(鼻环、耳棒的松紧度调节适宜为好),这时从各个方向推压动物头部"均不会出现移动。

(3)开颅钻孔前的备皮:剪去动物头部毛,用2%碘酒及75%酒精棉球作头部皮肤的消毒,沿矢状缝作一3cm长的皮肤切口,分离皮下组织,用双氧水清洁颅骨表面的筋膜及肌肉并剥离,推开骨膜,暴露前囟、人字缝及矢状缝。

(4)确定标准中线:将金属定位针向下移动到矢状缝上方后,再前后移动定位针,使定位针定位到前囟。

(5)小鼠海马定位:用定位针在前囟后2mm, 矢状缝旁开2.5mm处定位一点,即为海马的平面位置,然后在此点上用钻孔针在颅骨上钻一小圆孔。

(6)注射药物:小鼠海马则位于该圆孔下2 mm,将1ml注射器吸入药物安置到MC-5微操作仪上,操作仪器使注射器针头由小鼠脑钻孔处下降2mm时完成药物注射到小鼠脑海马处。

(7)制作脑组织切片:将小鼠脑制作成切片,显微观察小鼠脑中红染料位置来验证小鼠脑海马定位是否准确

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